[摘 要] 随着水产养殖业的飞速发展，寄生虫、病毒成为了影响水产养殖业发展的重要因素，并且威胁着人们的饮食安全。鱼用疫苗作为目前控制鱼类病害的主要方法，为水产养殖业的发展带来了机遇。本文就鱼用疫苗免疫效果评价的发展进行研究，以期对控制鱼类病害，促进水产养殖业发展具有影响作用。
[关键词] 鱼用疫苗；免疫效果；评价指标
[中图分类号] S948 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909（2016）32-95-2
病害是影响我国水产养殖业发展的关键因素，我国水产养殖业因病害造成的经济损失十分巨大。疫苗免疫是控制病害发展的重要方法之一，但截至目前我国还没有完善的评价疫苗免疫效果的体系。本文就鱼用疫苗免疫效果评价的发展进行探讨，希望对水产养殖业的发展具有重要意义。
1 如何判定疫苗免疫的效果
为了准确判定鱼苗在接受免疫之后的应答情况，除了使用活菌病毒来检测以外，还可以通过测定受免鱼血清里的抗体等方法来判定。对于结构较为简单的疫苗，可以通过测定血清中被中和的抗体，准确判定疫苗的免疫水平以及受免鱼的防御水平。但对于一些结构复杂、利用致病机制的细菌性疫苗来说，仅仅观察一两项检测指标是很难判定受免鱼免疫防御水平的。这关键在于尽管研究者可以检测血清中中和抗体、调理抗体的情况，但是由于受免鱼在接受免疫之后应答情况较为复杂，是多种免疫细胞及其细胞因子共同完成的生理学过程。所以，仅仅依据一两项指标是很难反映受免鱼免疫应答情况的。但是，通过对以上指标的检测可以判定受免鱼某项特异性或非特异性应答的变化程度。
2 鱼用疫苗免疫效果评价指标
2.1 特异性免疫效果评价指标
2.1.1 血清抗体效果评价。特异性免疫主要包括由T淋巴细胞和B淋巴细胞分别介导的细胞免疫及体液免疫。因为鱼类属于低等的脊椎动物，具有特异性免疫功能但不完善。目前，我国对鱼类细胞免疫的研究还比较少，大多是通过体液免疫来评定受免鱼的免疫效果。通过了解诸多研究结果可知，受免鱼血清的抗体效价可以很好地反映免疫应答的水平。受免鱼接种之后，其血清抗体的效价就会明显提高，这代表受免鱼得到了较好的免疫效果。所以，经常将血清抗体效价作为评价疫苗免疫效果的关键指标。但经过一些研究专家的深入研究发现，仅仅依据血清抗体效价有时也无法体现受免鱼免疫效果。这就代表着对于一些疫苗，体液免疫产生的特异性抗体是无法准确反映疫苗的免疫情况的，影响疫苗的免疫效果还有其他影响因子。
2.1.2 主要组织相容性复合体基因变化。主要组织相容性复合体是产生免疫效应的关键成分，由其编码的蛋白附着于细胞的表面位置，能够将抗原物质传递给T淋巴细胞。主要组织相容性复合体Ⅰ将抗原传递给CD8和T细胞，而主要组织相容性复合体Ⅱ将外源性抗原传递给CD4和T细胞。斑马鱼在接种鲁氏耶尔森菌弱毒之后，主要组织相容性复合体的Ⅰ和Ⅱ指标会呈现上升的趋势，而给斑马鱼接种爱德华氏菌弱毒以后，却发现主要组织相容性复合体的Ⅰ的指标上升，而Ⅱ的指标下调，并且此疫苗呈现出较好的免疫效果。
2.2 非特异性免疫效果评价指标
非特异性免疫系统是鱼类抵抗外来病原体的第一道防线，通过凝集沉淀、细胞溶解、酶抑制、微生物抑制4种方法来发挥效果。鱼类在接种疫苗以后，非特异性免疫就可以产生应答。
2.2.1 溶菌酶活动。溶菌酶主要存在于鱼类的组织细胞、黏液及血清当中，是反映鱼类非特异性免疫的一项重要指标。溶菌酶经过水解可以产生病菌黏多糖，以此来抵抗外来病菌的侵入，并且还对寄生虫、真菌等有一定的抑制效果。但研究发现鱼类体表的溶菌酶对外来病原体没有明显的抗菌效果，这一研究得到了Magarinos等的证实。由此可以看出，利用溶菌酶作为评价免疫鱼免疫效果的重要指标要非常慎重，因为溶菌酶不是影响鱼类免疫效果的唯一因素。
2.2.2 超氧化物歧化酶活性。这一活性酶广泛存在于各种需养生物体中，是需养生物机体当中抗氧化系统的重要成分，其能够清除或抑制超养阴离子自由基，以避免机体遭受氧化损伤。超氧化物歧化酶的活性与生物机体当中的免疫水平有着紧密的联系，能够提高巨噬细胞活性，增强机体的免疫水平。刘秋凤等[1]的研究证实了这一点，在生物机体注入疫苗后，超氧化物歧化酶的活性会明显提高，机体的免疫水平也会明显增强，因此可以将超氧化物歧化酶的活性作为评价疫苗免疫效果的指标之一。
2.2.3 血清抑菌活性。血清抑菌活性是由体液免疫和细胞免疫共同作用的效果，其体现的是对机体外来的病原体的抵御能力，同时也是衡量机体免疫水平的关键指标。许增辉等[2]也证实了注入疫苗的鱼体血清抑菌的活性会明显高出未注入疫苗的鱼体。由此可以看出，血清抑菌活性也是影响免疫鱼免疫效果的指标之一[3]。
2.2.4 外周血细胞的变化。因为外周血细胞是重要的免疫细胞，研究人员可以通过测量免疫鱼体中的各种外周血细胞的数量变化，来了解机体的免疫水平。接种疫苗的鱼体外周血细胞的数量会明显增加。白细胞当中的嗜中性粒细胞及单核细胞是鱼体当中的主要吞噬细胞，起到防御外来病原体入侵的作用，是反映鱼体非特异性免疫能力的关键指标。如果在鱼体中接种疫苗，那么其白细胞的吞噬活性会与接种疫苗的免疫能力呈正比例关系。另外，张波等[4]在对青鱼注入嗜水气单胞菌疫苗之后，发现外周血细胞中的红细胞存在一定的吞噬能力，对免疫鱼的免疫能力也有一定的影响作用。
2.2.5 测定一些免疫基因的表达量。因为鱼体在接种疫苗后其非特异性免疫的相关基因会发生一定的变化，以此来增强鱼体的免疫水平，所以研究人员可以通过测定一些免疫基因的表达量，来评价疫苗的免疫水平。
首先是对补体C3、补体C4基因表达量的测定。在鱼类的非特异性免疫系统中，补体系统占据重要地位，通过经典、凝聚、激活3条途径来抵御外来病原体的入侵，其中的补体C3是这三条途径的汇合点，起着重要的枢纽作用；而补体C4则是凝聚与经典途径的起点，在补体系统中占据重要地位。如果补体C3、C4的基因表达量提高，代表着生物机体的免疫能力增强。
其次是测定细胞因子的基因表达量。白细胞介素1β属于促炎症细胞因子，是由巨噬细胞等多种细胞共同产生的，经过研究者发现给鱼体注入弱毒疫苗时能够很好地激活鱼体脾脏中的巨噬细胞，进而使得提高白细胞介素1β的基因表達量。但是，当注入没有生物活性的疫苗时，采取浸浴的方式接种以后，无法刺激白细胞介素1β的数量上升。另外，白细胞介素8和白细胞介素10分别是CXC趋化因子和抗炎症细胞因子，再给鱼体接种疫苗后，这两项指标都会出现上调，从而增强免疫鱼的免疫水平。
最后是测定其他非特异性免疫相关基因表达量，比如α趋化因子、细胞分化簇8、转化生长因子等，这些相关基因的表达量也在一定程度上能够反映鱼体在接种疫苗后的免疫水平。但将这些影响因素作为评价免疫效果的研究试验还比较少，因此未完全将这样因素作为评价免疫效果的指标。
3 结语
随着我国水产养殖业的不断发展，无公害健康养殖逐步占据养殖业主流。免疫预防是鱼类病虫控制的主要发展方向，做好研究工作，研究出副作用小的高效疫苗已是养殖业发展重点关注的内容。采取有效的方法来评价疫苗的免疫效果越发显得重要。因此，不断改进评价疫苗免疫效果的方法，完善评价指标，对疫苗及水产养殖业的发展具有良好的促进作用。
参考文献
[1]刘秋凤.草鱼呼肠孤病毒微载体培养技术与灭活疫苗浸泡免疫效果研究[D].上海：上海海洋大学，2013.
[2]徐增辉，陈汉忠，陈明，等.海豚链球菌疫苗对罗非鱼免疫功能的影响[J].大连水产学院学报，2008（6）：413-418.
[3]梁海鹰，陈永新，简纪常，等.溶藻弧菌鞭毛蛋自flac基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护[J].水产学报，2013（1）：125-131.
[4]张波，曾令兵，罗晓松，等.嗜水气单胞菌3种疫苗免疫的青鱼外周血免疫指标的变化[J].华中农业大学学报（自然科学版），2012（1）：100-105.