【摘要】 目的 研究乙肝病毒 DNA 含量与乙肝病毒感染免疫学标志物是否具有相关性。 方法 应用荧光定量PCR 法对500 例乙型肝炎患者及 100 例健康对照者的血清进行 HBV DNA 含量检测，并用 ELISA 法进行乙型肝炎病毒免疫学标志物检测。 结果 不同组之间 DNA 含量有差异(P<0.01)。HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 含量阳性检出率明显高于除 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)组以外的其他各组(P<0.01)。HBeAg 阳性和 HBV DNA 阳性有较高的一致性(P<0.01)。结论 500 例乙型肝炎患者中HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 含量阳性检出率及 HBV DNA 的平均含量最高，HBeAg 检测和 DNA 定量检测阳性率具有较高一致性。
【关键词】 乙肝病毒；荧光定量 PCR；HBV DNA
The correlation studies about detection of DNA content and immunological markers in hepatitis B patients
【Abstract】 Objective To investigate the correlation of HBV DNA level with hepatitis B virus infection and immunological markers in common code. Methods 500 serum samples of hepatitis B virus infectors and 100 healthy controls were collected，the HBV DNA level were detected by fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR)and immunological markers of hepatitis B virus were detected by ELISA. Results There were differences in level of HBV DNA among each group(P<0.01). The detection rate of HBV DNA in the group of HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)was obviously higher than other groups except the group ofHBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)(P<0.01).Conclusion The detection rate of HBV DNA and the average concentration of HBV DNA in HBsAg(+)，HBeAb(+),HBcAb(+)group is higher than other groups. The detection rate of HBeAg is coincident with the positive rate of HBV DNA.
【Key words】 Hepatitis B virus; Fluorescence quantitative PCR; HBV DNA
目前感染乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的检测方法主要有 ELISA 法检测免疫学血清标志物和荧光定量 PCR 法检测 DNA。ELISA 法主要检测 HBV 血清标志物，即乙肝五项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)，反映病毒的表达水平，也间接地反映了病毒复制水平，在乙型肝炎的病因分析、疾病进程和预后判断上有着不可替代的作用，是临床诊断、治疗、分析和判断 HBV 感染者病程及传染性的重要依据。荧光定量 PCR 法检测的是体内病毒的拷贝数，具有高度的灵敏性和特异性，并且重复性好、检测范围宽，其目的主要是判断目前患者病毒复制程度的大小、传染性大小，尤其在判断乙肝的转归以及用药前后的疗效判断上有很重要的作用，同时也是重要的抗病毒治疗用药指征之一。
本研究就以上两种方法对 HBV 检测结果进行分析，以探讨 ELISA 法与 PCR 法检测结果的相关性及不同的临床意义，从中了解乙型肝炎感染情况，为临床判断乙型肝炎患者病情和疗效观察提供参考。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2008年6月至2009年6月间吉林省医院住院及门诊乙型肝炎患者 500 例，其中男 334 例，女166 例，年龄 10~70 岁，诊断符合 2000 年9月西安全国传染病寄生虫病学术会议修订《病毒性肝炎防治方案》所定的标准［1］。同时收集 100 例乙肝病毒标志物全阴性的健康体检者血清标本作为对照组。根据检出的常用模式将研究对象分为 10 组，见表 1 的分组栏(每组中的项目均为阳性)。
1.2 试剂与仪器 ELISA 检测试剂由上海科华生物技术有限公司提供。HBV DNA含量检测试剂盒由深圳匹基生物技术开发有限公司提供。罗氏荧光定量 PCR 仪 LightCycler。
1.3 实验方法 HBV DNA 含量检测及乙肝病毒感染血清学标志物检测均严格按照试剂盒说明书要求进行。
1.4 统计学方法 采用 SPSS11.0 统计软件统计分析，HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)组与其他各组的比较采用χ2检验，P<0.05 具有统计学意义。
2 结果
通过χ2检验发现 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 阳性检出率明显高于除 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)组以外的其他各组(P<0.001)见表 1。HBeAg 和 HBV DNA 阳性检出率见表 2。
3 讨论
实验结果表明，HBsAg(+)、HBeAg (+)、HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 的阳性检出率最高，为91.8%，经统计学处理与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.001)，说明HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)患者 HBV DNA 具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。这一结果还说明 HBeAg阳性与 HBV DNA阳性存在一致性。值得注意的是，在 HBeAg阳性患者血清中仍有13例 HBV DNA 结果为阴性，考虑可能是由于患者体内HBV DNA 复制水平低，而在此之前所表达的 HBeAg 尚未被完全降解，仍处于较高水平，故形成了HBV DNA与HBeAg 时相分离的现象［2］。这就提示仅以 HBV DNA的检测来判断是否感染可能存在漏诊的情况。
180例 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组患者血清HBV DNA 阳性检出率为 38.3%；57例 HBsAg (+)、HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 阳性检出率为 59.7%，这一结果说明 HBeAg阴性、HBeAb 或 HBcAb 阳性者仍可以有 HBV DNA 阳性检出，提示患者体内仍有 HBV 存在或复制，故 HBeAg 的消失，HBeAb 或HBcAb 的出现并不能代表病毒停止复制或病情好转，只能说明复制水平的降低。分析其原因可能与 HBV 发生前 C 区基因突变或机体发生特异性的免疫耐受有关［3］。
31例 HBsAb(+)患者中 HBV DNA 阳性率为 9.7%，其原因可能为：长期多次反复小剂量接触 HBV未见或少见发病，出现 HBsAb(+)，但体内仍可存在低拷贝的HBV 颗粒；或者存在其他 HBV 血清学亚型感染［4］。
阴性对照组也检出8例 HBV DNA阳性，检出率为 8.0%，其原因可能是：①HBV 发生前 C 区基因突变或机体发生特异性免疫耐受有关。②HBsAg 确已清除，但 HBV DNA 仍持续存在［5］。③ PCR 方法存在假阳性。
综上所述，FQ-PCR 和 ELISA 两种检测方法具有良好的相关性和互补性。长春市的 500例患者各模式分组中HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 阳性检出率和含量明显高于其他各组。HBeAg 和 HBV DNA 阳性检出率有较高的一致性。
参 考 文 献
［1］ 病毒性肝炎防治方案(试行)(2000 年西安全国传染病寄生虫病学术会议修订). 中华传染病杂志，2000，8(6)：324.
［2］ 丁柳，刘丽，雷学忠.5600 例血清标本乙肝病毒 DNA 定量与免疫学标志物检测的对比分析. 四川大学学报(医学版)，2006,37(2)：313.
［3］ 朱传武. HBV 前 C/C 基因变异与宿主 T 细胞免疫的关系.国外医学免疫学分册2001，24(6)：289.
［4］ 朱艳宾，刘增佑.乙型肝炎孕妇早期血清 HBV DNA 含量与胎儿宫内感染关系研究.河北医药，2008，30(12)：1928-1929.
［5］ 汤立新.血清 HBV DNA 荧光定量 PCR 检测与乙肝病毒标志物模式的相关性. 职业卫生与病伤，2007，22(2)：141.
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