摘 要：目的：探索盐酸阿霉素（DOX）和多西他赛（DOC）对于耐药性胃癌细胞的協同干预效果。方法：通过MTT法检测DOX和DOC在人胃癌细胞SGC-7901及其多药耐药株SGC-7901 ADR的IC50值，根据IC50值设置不同的双药配比，并利用CompuSyn软件计算协同指数，以判断双药是否具有协同效果。结果：耐药性胃癌细胞SGC-7901 ADR 对DOX和DOC均有较强的耐药性，相比之下，SGC-7901细胞对两种药物的敏感性较强。双药联合使用可大大提高抑制效果。半数抑制效果下，双药联合中的DOX剂量减少为单药干预的1/10以下，DOC剂量也有一定程度的减少。而DOX和DOC比例为1∶8、1∶12和1∶16时表现出非常明显的协同效果。结论 DOX和DOC联合干预可有效抑制耐药性胃癌细胞的增殖。可为进一步开发耐药性胃癌治疗的新方法提供理论依据。
关键词：耐药性胃癌;联合化疗;盐酸阿霉素;多西他赛
1 研究背景
胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，预后较差，死亡率高居前列。化疗是早期胃癌和手术后联合治疗的首选。但其对正常细胞也有损伤，毒副作用大。另外，随着化疗的进行，胃癌会产生多药耐药性。耐药性的出现直接导致效果降低，造成治疗失败及肿瘤复发。因此，寻求更为有效的化疗方案，提高治疗效果就具有非常重要的临床意义。
联合化疗通过发挥药物协同作用来提高疗效，减少耐药的发生;减少剂量从而降低毒副作用。临床上对于联合化疗的使用效果在多年前已得到了研究证实，临床上联合化疗已经逐渐替代单药化疗。本研究通过将两种经典抗肿瘤药物——盐酸阿霉素和多西他赛进行组合，用于干预多药耐药性胃癌细胞SGC-7901 ADR，探索更为有效的用药配比。
2 研究方法
2.1 材料
DOX、DOC、MTT均购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。DMEM高糖培养基购自hyclone公司。胎牛血清（FBS）购买于杭州四季青生物工程系有限公司。人胃癌细胞SGC-7901及其多药耐药株SGC-7901 ADR由空军军医大学提供。
2.2 MTT法检测DOX和DOC对细胞增殖抑制效果
将SGC-7901及SGC-7901 ADR细胞在37℃，5%CO2条件下进行培养。再以5000细胞/孔的密度铺96孔板内，加入含有不同浓度梯度的DOX或DOC，培养96h后去除孔内的培养基，每孔加入200μL含有浓度为100ng/mL MTT的完全培养基，培养4 h后去除培养基，每孔加入100μL DMSO，震荡10min后利用酶标仪测定每孔在495nm处的吸光值。根据所得数据计算药物的IC50值。
2.3 检测DOX和DOC对多药耐药性细胞的联合干预效果
选用细胞为SGC-7901ADR，根据IC50值设置DOX和DOC的药物浓度。DOX与DOC的摩尔比例为4∶1至1∶20，测算不同配比下的抑制率，应用CompuSyn软件计算联合作用指数（combined index，CI），其中CI<1为协同作用，CI=1为相加作用，CI>1为拮抗作用。
3 结果
3.1 DOX与DOC对SGC-7901及SGC-7901ADR细胞的抑制效果
两种药物针对两种细胞均显示出了抑制效果。SGC-7901ADR细胞方面，DOX的IC50值为797nM，DOC的IC50值则为924nM。两种药物在野生型SGC-7901细胞的IC50值则非常小，DOX为88nM，DOC为107nM。该结果表明SGC-7901ADR细胞对两种药物的耐受程度远远高于野生型SGC-7901细胞。
3.2 DOX与DOC对SGC-7901ADR细胞的联合干预效果
当两种药物联合使用后，对SGC-7901ADR细胞同等抑制率下剂量有显著的降低。DOC在有效的联合干预中占比虽然较高，但依然比单独干预中有明显的剂量降低。而DOX则显示出非常明显的降低，在低于1∶8的比例之后，其剂量降低仅有单用的1/10，甚至更低。CI值反映出两种药物具有非常好的协同作用。当比例为1∶8、1∶12和1∶16时，其CI指数均小于1。结果表明此两种药物通过所试比例进行双药联合干预，可有效抑制多药耐药性胃癌细胞SGC-7901ADR的增殖。
4 讨论
胃癌的耐药性是影响化疗效果的主要因素之一。原因在于其发生发展是一个非常复杂的过程，具有因素多，途径多等特点，当肿瘤细胞长期暴露于某一种药物之下，则会通过不同机制和通路对该药物产生作用，降低其对细胞的损害。如果将两种或多种具有不同机理的药物联合使用，则有可能起到协同增效的作用。本研究发现将两种经典的抗肿瘤药物——DOX和DOC联合使用后，可有效降低药物的有效剂量，提高抑制效果。表明两种药物在所试比例和剂量下可有效抑制多药耐药性胃癌的发生和发展。该研究结果可为日后的胃癌临床化疗提供有效的参考。
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