摘 要 试验分析了基因型、愈伤组织类型、2，4-D浓度、蔗糖浓度，起始接种量等各因素对相思树悬浮细胞培养的影响。结果表明：选择淡黄色，质地鲜嫩松脆的愈伤组织作为相思树悬浮培养的材料，能较快地建立起悬浮细胞系。黑木相思细胞小，胚性强，分散性好，最容易建立起悬浮细胞系。当蔗糖浓度为30 g/L，2，4-D浓度为0.5 mg/L时，适宜于悬浮细胞的保持。起始接种量对相思悬浮细胞系生长也有很大影响，从保持悬浮细胞系的角度看，每瓶25 mL培养基中适宜的接种量为0.5～1.0 g。台湾相思悬浮细胞培养周期以7 d继代1次，卷荚相思悬浮细胞培养周期以8～10 d为宜。同时，通过对悬浮细胞培养的显微观察可以看出不同基因型的相思树悬浮细胞，其细胞生长状态各不相同。
关键词 相思树；悬浮细胞；细胞学观察
中图分类号 S687；Q813.1 文献标识码 A
Abstract The effects of different genotypes， callus types， concentrations of 2，4-D， sucrose concentrations， and inoculation amount on the cell suspension culture were analyzed in the experiment. The results showed that the best initial material of the Acacia spp. for cell suspension culture was the fresh yellow， loose and soft callus II and Ⅲ， which were propitious to establish the suspension cell culture system quickly. In addition， the cells of the A. melanoxylon were small， of strong embryogenic characteristics and fine dispersion， which were easy to establish the cell suspension system. The cell suspension could be maintained well under the conditions that the sucrose concentration was 30 g/L and the 2，4-D concentration was 0.5 mg/L. And the initial inoculation amount also influenced the culture of cell suspension， of which the best inoculation amount was 0.5-1.0 g in 25 mL calli each bottle. The suitable subculture cycle of the cell suspension culture was 7 d in A. confusa， while 8-10 d in A. concinnata. By the histological observation， it showed that there were different cell growth in different genotypes.
Keywords Acacia spp.； cell suspension； histological observation
DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.09.016
相思树是中国引种的重要速生树种，在中国南方短周期工业原料林发展、水土保持和丰富林木种质资源等方面具有重要作用和地位[1]。植物细胞悬浮培养是植物细胞生长的微生物化，由于其分散性好，细胞形状及细胞团大小大致相同，而且生长迅速，重复性好，易于控制等有利因素[2]，因此被广泛用于细胞学、生物化学、生理学、发育生物学、遗传学、分子生物学的研究。悬浮单细胞或小细胞团不仅可直接进行遗传转化、原生质体分离、体细胞杂交等的研究，还可用于生产次生代谢物以及筛选细胞突变体等，因此悬浮细胞已经成为植物生物技术中一个最有用的工具之一[3]。本实验室林珊珊[4]、姬明[5]分別对台湾相思和黑木相思的悬浮细胞系的建立和保持做了研究，叶玲娟[6]研究了相思树的细胞培养及其体胚发生，黄敬文等[7-8]利用黑荆树悬浮细胞进行低 温驯化，Vengadesan等[9]建立了藤金合欢的悬浮细胞系并通过体胚发生方式获得再生植株，Arumugam等[10]利用台湾相思悬浮细胞系进行了诱导子对抗氧剂诱导的影响，Hustache等[11]建立了阿拉伯胶树的悬浮细胞系。同时，Gantait等[12]和Vengadesan等[13]对相思树的组织培养与快繁应用做了比较详细的评述。
本文以台湾相思（Acacia.confusa）、卷荚相思（A. concinnata）及黑木相思（A. melanoxylon）愈伤组织为材料，建立了相思树的悬浮细胞系，比较了愈伤组织类型、不同的2，4-D浓度、不同的蔗糖浓度、不同接种量对相思树悬浮细胞生长的影响。并在此基础上，研究了相思树的悬浮细胞再生愈伤组织及其细胞学观察，以期为相思树遗传转化、细胞突变体筛选等提供优良的试验体系，为苗木快繁、体胚诱导、原生质体分离及有用次生物质生产等方面的研究奠定技术基础。
1 材料与方法
1.1 材料
以台湾相思、卷荚相思及黑木相思愈伤组织为材料[4]，由福建农林大学园艺植物生物工程研究所提供。