[摘要]目的 探讨百令片对维持性血透患者T淋巴细胞的影响。方法 以在我院血液净化中心维持性血液透析患者为研究对象，用回顾性分析的方法，接受百令片治疗者为治疗组，未接受百令片治疗者为对照组，检测各组患者外周血淋巴细胞表达频率、T细胞及亚群表达比例；回顧分析两组患者近1年因肺部感染住院频次及住院时间。结果 两组间基本资料血清肌酐、尿素、年龄、血清白蛋白、血红蛋白、透析时间、透析频率等方面两组无显著性差异。两组患者外周血淋巴细胞均较正常值下降，但服用百令片组淋巴细胞绝对值（1.46±0.12）G/L、T淋巴细胞比例均较未服用组高[（1.46±0.12）G/L vs（1.16±0.08）G/L；（72.34±2.86）% vs（62.74±3.45）%，P<0.05]；两组患者T淋巴细胞亚群比例（CD4+/CD8+T）无显著差异。服用百令片组患者近1年因肺部感染住院频率、住院时间显著低于对照组[0.07 vs 0.23；（6.67±0.33）d vs（9.57±0.72）d，P<0.05]。结论 百令片能改善血透患者的低淋巴细胞血症，部分纠正患者T淋巴细胞比例，调节患者的免疫功能，减少患者因肺部感染住院频次。
[关键词] 维持性透析；淋巴细胞；CD3；CD4；CD8
[中图分类号] R587.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）15-178-04
[Abstract] Objective To investigate the efficacy of Bailing tablets on peripheral blood T cells in Maintenance hemodialysis（MHD） patients. Methods The maintenance hemodialysis patients in our hospital blood purification center were selected as the study object， and they were retrostpectively analyzed. The MHD patients by Bailing tablets were treatment group， patients did not receive Bailing tablets treatment were control group. The peripheral blood lymphocytes， the percentage of T lymphocyte，CD3+ CD8+ T cells，CD3+ CD4+ T cells were measured. Observe the hospitalization rate and hospital stays of the two groups for pulmonary infection during the last year were retrospectively analyzed. Results There were no significant differences in the serum creatinine， Urea， fasting blood sugar， between the two groups. Peripheral blood lymphocytes of the two groups were decreased， compared with the normal level. However， the percentage of lymphocyte and T lymphocyte in the Bailing group were higher than the control group[（1.46±0.12）G/L vs （1.16±0.08）G/L， （72.34±2.86）% vs （62.74±3.45）%，P<0.05）]. There was no significant difference in CD4+/CD8+T lymphocyte of the two groups. In latest one years， the frequency and length of hospitalization of the Bailing group were significantly lower than the control group[0.07 VS 0.23， （6.67±0.33）d vs （9.57±0.72）， P<0.05]. Conclusion Bailing can increase the peripheral blood lymphocytes of MHD patients， partly correct the proportion of T lymphocytes. Bailing tablets may improve the immunity function of MHD patients， and decrease the hospitalization rate for pulmonary infections .
[Key words] Maintenance hemodialysis； Lymphocyte； CD3； CD4； CD8
维持性血液透析是终末期肾脏病（ESRD）患者维系生命的重要手段，其全因死亡率是普通人群的10～20倍以上[1]，其中感染占第2位[2]。维持性血液透析患者感染性疾病发病率高、进展快、病情重、死亡率高，免疫力下降是患者感染的重要因素。维持性血液透析患者免疫力低下，与患者体内尿毒
症毒素的蓄积所致体液免疫、细胞免疫功能紊乱相关，相关的免疫细胞为单核巨噬细胞系统、中性粒细胞、T/B淋巴细胞等[3]。这些免疫细胞可表现为数量、细胞亚群的比例异常，细胞超微结构及细胞因子的表达异常，细胞表面受体/配体的表达量异常，它们之间相互影响、相互作用促成尿毒症患者免疫功能的紊乱。
既往研究资料显示冬虫夏草菌粉存在免疫调节作用，可以增强巨噬细胞的吞噬能力，提高自然杀伤细胞（NK）的活性[4]，促进T细胞、B细胞及浆细胞的增值[5]，抑制促炎症细胞因子产生同时促进抑制炎症细胞因子产生的功效[6-7]。临床上，冬虫夏草菌粉在肾病领域主要用于降低蛋白尿、延缓肾脏纤维化、保护肾功能[8]；在呼吸领域可改善慢性阻塞性肺病患者的肺功能，减轻气道炎症反应[9]。但冬虫夏草菌粉能否提高透析患者免疫力，減少患者临床感染的发生率尚无明确报道。本试验以透析患者为研究对象，通过临床回顾性分析寻找依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
以我院的2015年12月～2016年12月维持性血液透析患者为研究对象，本透析中心共有血液透析患者147例，对患者进行以下纳入排除标准进行筛选。
纳入标准：慢性肾炎、高血压肾病、ADPKD所致终末期肾脏病患者，维持性血液透析1年以上，采用普通的血液透析方式，透析频率为3次/周，服用百令片1年以上为治疗组（每次3次，每次≥5片），近1年未服用百令片为对照组。
排除标准：（1）基础疾病为糖尿病所致终末期肾病，或并发有糖尿病患者；原发病为系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病所致肾衰竭患者；慢性肾衰竭合并慢性阻塞性肺病患者；极度消瘦、长期卧床，生活不能自理的患者；高龄患者（年龄>75岁）。（2）近期合并感染性疾病、消化道出血、严重心脑血管疾病患者；（3）采取高通量透析或普通透析合并血液灌流患者。（4）1年内未使用糖皮质激素，或其他免疫调节作用是西药或中药。
筛选后入组服用百令片透析组43例，其中男29例，女14例，平均年龄（56.1±4.1）岁；未服用百令片组30例，其中男18例，女12例，平均年龄（53.1±5.8）岁。基础疾病有慢性肾炎，高血压肾病，多囊肾，两组患者、年龄与基础疾病无显著差异（P>0.05）。
1.2 研究方法
检测两组患者外周血总淋巴细胞、T细胞比例，T细胞亚群的比例。回顾对比两组患者近1年因感染住院人次。本研究遵循赫尔辛基宣言，经过医院伦理委员会批准，所有入组患者均签署知情同意书。
1.3 主要试剂及仪器
红细胞裂解液，美国Biolegend公司；淋巴细胞分离液，中国达科为公司；鼠抗人FITC anti-human CD3、APC anti-human CD8、PE anti-human CD4及同型对照，美国biolegend公司；流式细胞仪为BD Accuri C6；血细胞分析仪等。
1.4 检测方法
采用EDTA抗凝管，透析前留取两组患者外周血2份（共约3mL）；1份通过血细胞分析仪检测各组患者淋巴细胞绝对值。另1份取0.5mL全血采用红细胞裂解液裂解红细胞后，流式染色，流式细胞仪分析。回顾统计1年内，两组患者因肺部感染性疾病住院频次，住院天数。
1.5 统计学方法
数据分析采用SPSS17.0，GraphPad Prism，BD Accuri C6自带软件进行数据处理及作图，计数资料通过χ2检验进行分析，计量资料符合正态分布，通过独立样本t检验分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者基线资料比较
百令片组患者平均服用百令片时间为132.12个月，合并用药均为常规降压、降糖药、纠正贫血、纠正酸碱平衡，钙磷代谢紊乱等常规用药，两组均无对免疫功能有影响的药物。两组患者血红蛋白、血清白蛋白、透析总时间等一般情况比较无统计学差异（P>0.05）。见表1。
2.2 两组患者淋巴细胞计数比较
两组患者淋巴细胞均低于正常范围，但服用百令片组其淋巴细胞计数显著高于未服用百令片组，未服用百令片组为（1.16±0.08）G/L；百令片组为（1.46±0.12）G/L，t=2.287，P<0.05），见图1。
2.3 两组患者T淋巴细胞比较
两组患者T淋巴细胞在淋巴细胞中所占比例，服用百令片组患者T淋巴细胞比例显著高于未服用百令片组[未服用百令片组T细胞占比为（62.74±3.45）%；百令片组为（72.34±2.86）%，t=2.376，P<0.05]。见图2。
2.4 两组T淋巴细胞亚群比较
两组患者T淋巴细胞亚群CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比例属于正常范围，但服用百令片组其比例略高于未服用百令片组，但无统计学差异[未服用百令片组为（2.63±0.22）；百令片组为（2.39±0.19），t=2.763，P=0.39]。见图3。
两组近一年内住院情况比较
服用百令片组近1年因呼吸道感染平均住院人次，平均住院天数显著低于未服用百令片组（P<0.05）。见表2。
3 讨论
根据本研究采用的血细胞分析仪，健康成年人外周血淋巴细胞计数范围为1.2～2.4G/L。尿毒症毒素蓄积致淋巴细胞凋亡增加及增值受抑制，维持性透析患者存在淋巴细胞减少症[10-11]。正常人群淋巴细胞中T细胞比例为70%～80%，本试验观察到相对于对照组，服用百令片组患者外周血淋巴细胞计数、T细胞表达频率均显著升高，趋于正常，表明百令片能改善患者的低淋巴细胞血症，其中T细胞比例增高明显。且其亚群CD3+CD4+/CD3+CD8+比例亦较对稍高，但无显著性差异。临床回顾性统计两组患者因肺部感染住院率、平均住院时间，服用百令片组均显著少于对照组，支持百令片能减少维持性血透患者肺部感染的住院率，缩短住院时间。以上试验表明，口服百令片，能改善维持性血透患者的低淋巴细胞血症，提高患者外周血T细胞数量，并减少患者肺部感染的发生几率。据以上数据推测口服百令片能部分改善维持性透析患者的抗感染能力，可能与其改善患者淋巴细胞数量、亚群比例相关。
国外研究显示尿毒症患者毒素蓄积（如氮质血症、氧化应激、糖基化终末产物、铁的超负荷、炎症）所致幼稚T细胞、记忆T细胞凋亡、耗损增加。本试验中印证了维持性透析患者外周血淋巴细胞、T细胞表达频率的下降[10-12]。百令片可改善患者的低淋巴细胞血症，具体机制本研究未涉及。尿毒症患者毒素的蓄积可导致患者内环境的紊乱，引起各种炎症介质、细胞因子的分泌异常，抑制骨髓的功能，引起细胞的凋亡增加。血液净化技术的改善，从根源上改善了尿毒症患者毒素的蓄积，挽救了无数人的生命，但不能彻底纠正毒素对机体的影响，这是尿毒症患者死亡率升高的根本原因所在[13]。百令片的作用机制可能是减少了毒素刺激所致致病性细胞因子的分泌，或是改善骨髓造血系统的抑制状态，具体的机制尚需进一步研究探讨[14]。尿毒症患者除了免疫力的下降，同时存在炎症反应增加，严重的心脑血管事件事，外周血管的粥样硬化、钙化均与之相关[15]。冬虫夏草菌粉肺减轻气道炎症反应，使非透析呼吸道疾患者群获益，同时对透析人群有效，其机制可能是抑制了促炎症细胞炎症因子的表达[16]。冬虫夏草菌粉能否抑制尿毒症患者的炎症反应，亦需要进一步验证。
本试验通过回顾性分析的方法，遗憾之处在于样本量偏少，因经费等原因未检测患者各种炎症因子的表达，未做未服用百令片组纵向自身对照研究。维持性透析患者患存在单核巨噬细胞系统、中性粒细胞系统等在两组患者中的变化，故未能提供更全面的证据表明冬虫夏草菌粉制剂对维持性血液透析患者免疫力的提高，尚需进一步研究证实。
综上所述，冬虫夏草菌粉制剂能有效改善维持性血液透析患者低淋巴细胞血症，改善T淋巴细胞亚群比例的失调，在临床上减少患者呼吸道疾病的发生率。
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（收稿日期：2017-03-09）